급성 호흡기 감염은 종종 바이러스로 인한 어린이의 호흡기 질환입니다. 호흡기 세정 바이러스 (RSV) 및 호흡기 아데노 바이러스 (ADV)는 어린이의 급성 호흡기 감염을 일으키는 두 가지 일반적인 병원체입니다. 가벼운 사례는 기침이나 콧물과 같은 감기 증상을 유발할 수 있지만 심한 경우는 폐렴 및 중이염과 같은 심각한 합병증을 유발할 수 있습니다. 세계 보건기구 (World Health Organization)의 권고에 따르면 병원체의 탐지는 빠르고 정확하며 민감하며 구체적이어야하며 전문 기술자 또는 대규모 기기에 의존해서는 안됩니다. 따라서 위의 탐지 요구 사항을 충족 할 수있는 RSV 및 ADV에 대한 탐지 방법을 개발하는 것이 특히 중요합니다.
Shenzhen Children 's Hospital 소아과 연구소의 Ma Dongli 이사의 연구 그룹은 4.6의 영향 요인을 가진 "과학적 보고서"에서 호흡기 일시 처리 바이러스 및 호흡기 아데노 바이러스의 검출을 위해 CRISPR/ CAS12A와 결합 된 멀티 플렉스 재조합 효소 폴리머 라제 증폭 분석 기사를 발표했습니다.
연구 개요
멀티 엔자임 등온선 빠른 핵산 증폭 기술 miRA는 CRISPR/CAS 검출 시스템과 결합되어 있습니다. MIRA 프라이머 및 CRRNA (CRRNA)를 설계하고, 다중 서열 비교를 수행하고, 반응 조건을 최적화하며, 형광 수치 감지 장치를 사용하여 감도 및 특이성을 검증합니다.
QPCR 결과를 비교 제어로 사용하여 160 개의 임상 인후 면봉 샘플의 시험 결과의 일관성을 연구 하였다.
실험 결과
1. miRA-CRISPR/CAS12A 검출 방법의 감도 및 특이성
MIRA 방법 검출에서, RSV-F1/R1 프라이머 쌍은 RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, FLUB, HMPV, FLUA 또는 RSV/ADV 공동 감염 환자로부터 핵산을 증폭시키는 데 사용된다. 증폭 된 밴드를 갖는 RSV 및 ADV를 제외하고, 다른 결과는 음성이었으며, 이는 선택된 MIRA 프라이머가 다른 8 개의 병원체와 교차 반응하지 않았으며 잘 보존되었음을 나타낸다.
이어서, RSV 및 ADV 재조합 플라스미드를 멸균수를 사용하여 10 번으로 희석하였고, RSV 및 ADV에 대한 검출 한계는 모두 10이었다.6사본/ml.
(1-10 : RSV, RSV/ADV 공동 감염 및 기타 호흡기 병원체 샘플을 가진 환자의 인후 면봉 샘플)
2. QPCR과 비교하십시오
QPCR 방법과 비교하여 RSV 및 ADV의 검출 한계는 모두 103 카피/ml입니다.
(RSV 및 ADV의 QPCR 검출 민감도)
MIRA-CRISPR 방법은 풀뿌리 실험실에 더 적합하며, 짧은 감지 시간, 간단한 작동 및 대규모 QPCR 기기가 실험 작업을 완료 할 필요가 없습니다.
3. 임상 샘플의 비교
인후 면봉 샘플은 급성 호흡기 감염이있는 160 명의 어린이로부터 수집되었습니다. 동시에, miRA-CRISPR 방법 및 QPCR 방법을 검출에 사용하고, 결과를 임상 시험 결과와 비교 하였다.
QPCR 방법과 비교하여, RSV 및 ADV에 대한 miRA-CRISPR 방법의 민감도는 각각 98.1% 및 91.4%였으며, 검출 특이성은 1 0 0%였다. 카파 값은 0.95보다 크며 일관성이 높습니다.
MIRA-CRISPR 방법은 RSV 및 Adv의 신속하고 민감하며 구체적인 탐지의 장점을 가지고 있습니다. 바이러스 감염을 신속하고 정확하게 감지 할 수 있으며 의료 자원이 부족한 지역에서 사용하기에 더 적합합니다.