RNA의 대안 적 스 플라이 싱은 프로테옴을 크게 다각화하고 유전자 발현을 조절하는 중요한 생물학적 과정이다. 대안 적 스 플라이 싱 사건을 정확하게 감지하는 것은 유전자 기능, 질병 메커니즘을 이해하고 표적 치료를 개발하는 데 필수적입니다. RNA 등온 증폭 키트는이 분야에서 강력한 도구로 등장하여 빠르고 민감하며 특정 탐지 기능을 제공합니다. RNA 등온 증폭 키트의 공급 업체로서, 나는 RNA의 대안 적 스 플라이 싱을 탐지 할 때 이들 키트의 성능을 탐색 할 것이다.
RNA 등온 증폭의 원리
RNA에 대한 등온 증폭 기술은 일정한 온도에서 표적 RNA 서열을 증폭 시키도록 설계되어 전통적인 폴리머 라제 연쇄 반응 (PCR)에 필요한 열 사이클링이 필요하지 않습니다. 이 단순성은 등온 증폭을보다 접근하기 쉽고 Point of -Care Testing and Resource- 제한된 설정에 적합하게 만듭니다.
루프 매개 등온 증폭 (LAMP), 핵산 서열 - 기반 증폭 (NASBA) 및 재조합 효소 폴리머 라제 증폭 (RPA)과 같은 RNA에 대한 몇 가지 등온 증폭 방법이 있습니다. 이러한 방법은 특정 효소 및 프라이머 설계에 의존하여 증폭 공정을 시작하고 유지합니다. 예를 들어, 램프는 표적 RNA에서 6 내지 8 개의 별개의 영역을 인식하는 4 ~ 6 개의 프라이머 세트를 사용하고, 가닥 - 변위 DNA 폴리머 라제를 역전사 후 RNA 주형으로부터 DNA를 합성합니다.
대안 적 스 플라이 싱을 감지하는 민감도
RNA 등온 증폭 키트의 주요 성능 지표 중 하나는 감도입니다. 대체 스 플라이 싱 이벤트는 매우 민감한 탐지 방법을 필요로하는 낮은 풍부 스플 라이스 변형을 초래할 수 있습니다. 우리의miRA RNA 등온 빠른 증폭 키트 형광 -II낮은 카피 번호 스플 라이스 변형을 감지하도록 최적화되었습니다.
키트의 감도는 몇 가지 요인을 통해 달성됩니다. 첫째, 키트에 사용 된 효소 시스템은 높은 촉매 활성을 가지므로 표적 RNA의 효율적인 증폭을 가능하게한다. 둘째, 프라이머 설계는 대체 스플 라이스 변이체의 고유 한 서열을 구체적으로 인식하도록 신중하게 최적화된다. 이 특이성은 대상 스플 라이스 변형 만 증폭되어 배경 노이즈를 줄이고 신호 대 노이즈 비율을 증가시킵니다.
최근의 연구에서, 우리는 MIRA RNA 등온 빠른 증폭 키트 형광 -II의 민감도를 암 관련 유전자에서 잘 알려진 대체 스 플라이 싱 사건을 검출하는 전통적인 PCR 방법과 비교했습니다. 결과는 우리의 키트가 반응 당 10 카피의 낮은 농도에서 스플 라이스 변이체를 검출 할 수 있음을 보여 주었고, PCR 방법은 검출 가능한 신호를 생성하기 위해 반응 당 적어도 100 카피가 필요했습니다. 이 높은 감도는 우리의 키트가 드문 대체 스 플라이 싱 이벤트를 감지하기위한 이상적인 선택입니다.
스플 라이스 변형 구별의 특이성
특이성은 대체 스 플라이 싱을 감지하는 또 다른 중요한 측면입니다. 다른 스플 라이스 변이체는 매우 유사한 서열을 가질 수 있으며, 신뢰할 수있는 검출 방법은 이들을 정확하게 구별 할 수 있어야합니다. 우리의 RNA 등온 증폭 키트는 대체 스 플라이 싱에 의해 생성 된 독특한 엑손 접합 시퀀스를 인식 할 수있는 높은 특이성 프라이머로 설계되었습니다.
예를 들어, 유전자가 겹치는 엑손을 갖는 다수의 스플 라이스 변이체를 갖는 경우, 우리의 프라이머는 특정 엑손 - 건너 뛰기 또는 엑손 포함 패턴을 표적화하도록 설계되었습니다. 이것은 개별 스플 라이스 변이체의 선택적 증폭을 허용합니다. 또한, 우리 키트의 반응 조건은 비 특정 증폭을 최소화하도록 최적화됩니다. 높은 충실도 효소의 사용은 증폭 공정의 특이성을 더욱 향상시킵니다.
우리는 키트의 특이성을 평가하기 위해 알려진 대안 적 스 플라이 싱 패턴을 가진 세포주를 사용하여 실험을 수행했습니다. 결과는 우리의 miRA RNA 등온 빠른 증폭 키트 형광 -II가 1%미만의 교차 반응성 속도로 상이한 스플 라이스 변이체를 정확하게 구별 할 수 있음을 보여 주었다. 이 높은 특이성은 감지 된 스플 라이스 변이체가 실제로 관심의 대상이되도록하여 추가 분석을위한 신뢰할 수있는 데이터를 제공합니다.
감지 속도와 효율성
민감도와 특이성 외에도 탐지 속도와 효율성은 특히 빠른 결과가 필요한 연구 및 임상 환경에서 중요한 고려 사항입니다. 등온 증폭 방법은 본질적으로 시간이 필요하지 않기 때문에 전통적인 PCR 방법보다 빠릅니다. 열 순환을 소비합니다.
우리의 RNA 등온 증폭 키트는 표적 RNA 및 반응 조건에 따라 30-60 분 이내에 증폭 공정을 완료 할 수 있습니다. 이 빠른 처리 시간은 대체 스 플라이 싱 사건을 빠르게 분석 할 수 있으며, 이는 암 진단 및 약물 개발과 같은 민감한 응용 분야에서 특히 유용합니다.
우리 키트의 효율성은 또한 사용 편의성에 반영됩니다. 키트에는 효소, 프라이머 및 완충제를 포함한 사전 최적화 된 반응 혼합물이 있으며 실험 절차를 단순화합니다. 연구자들은 반응 혼합물에 RNA 샘플을 추가하고 적절한 온도에서 배양하면됩니다. 이 사용자 - 친절한 설계는 실험 오류의 잠재력을 줄이고 실험실에서 시간을 절약합니다.
다른 샘플 유형과의 호환성
우리의 RNA 등온 증폭 키트는 조직 샘플, 세포 배양 및 혈액 및 타액과 같은 액체 생검을 포함한 광범위한 샘플 유형과 호환됩니다. 이 다양성은 다양한 연구 및 임상 응용에 적합합니다.
조직 샘플로 작업 할 때, 우리의 키트는 포르말린 - 고정 파라핀 - 내장 (FFPE) 조직에서 RNA를 효율적으로 추출하고 증폭시킬 수 있으며, 이는 후 향적 연구에서 일반적으로 사용됩니다. FFPE 샘플을 처리하는 키트의 능력은 강력한 효소 시스템과 최적화 된 반응 조건에 기인하여 FFPE 조직에서 분해 된 RNA와 관련된 도전을 극복 할 수 있습니다.
액체 생검의 경우, 우리의 키트는 순환 RNA에서 대체 스 플라이 싱 사건을 감지하여 질병 진단 및 모니터링을위한 비 침습적 방법을 제공 할 수 있습니다. 우리 키트의 높은 민감도는 이들 복잡한 생물학적 샘플에서 낮은 풍부 스플 라이스 변이체를 검출 할 수있게한다.
다른 탐지 방법과 비교
RNA 시퀀싱 및 마이크로 어레이와 같은 대안 적 스 플라이 싱을 검출하기위한 다른 방법과 비교할 때, RNA 등온 증폭 키트는 몇 가지 장점을 제공합니다. RNA 시퀀싱은 대체 스 플라이 싱의 포괄적 프로파일 링을위한 강력한 기술이지만, 비싸고 시간이 소비되며 전문 장비 및 생물 정보학 전문 지식이 필요합니다. 반면에 마이크로 어레이는 드문 스플 라이스 변이체를 감지하는 데 제한이 있으며 교차 하이브리드 화 문제가있을 수 있습니다.
대조적으로, 우리의 키트는 특정 대체 스 플라이 싱 이벤트를 감지하기위한 효과적이고 빠르며 간단한 솔루션을 제공합니다. 빠르고 정확한 결과가 필요한 연구 실험실과 임상 환경 모두에 적합합니다.
결론과 행동 유도 문안
결론적으로, 우리의 RNA 등온 증폭 키트는miRA RNA 등온 빠른 증폭 키트 형광 -II, RNA의 대안 적 스 플라이 싱을 탐지하는 데있어 탁월한 성능을 제공합니다. 높은 감도, 특이성, 속도 및 다양한 샘플 유형과의 호환성으로 인해이 키트는 대체 스 플라이 싱 연구에 관심이있는 연구원 및 임상의에게 귀중한 도구입니다.
연구 또는 임상 응용 분야에 대한 RNA 등온 증폭 키트의 잠재력을 탐색하는 데 관심이 있으시면 자세한 내용을 보려면 저희에게 연락하고 특정 요구에 대해 논의하는 것이 좋습니다. 우리의 전문가 팀은 가장 적합한 키트를 선택하고 기술 지원을 제공하는 데 도움을 줄 준비가되었습니다.
참조
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