RNA 등온 증폭 기술은 분자 생물학에서 강력한 도구로 등장하여 전통적인 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 방법에 대한 빠르고 민감하며 비용 - 효과적인 대안을 제공합니다. RNA 등온 증폭 키트의 공급 업체로서, 우리는 억제제가 이러한 키트의 성능에 포기할 수있는 도전을 잘 알고 있습니다. 이 블로그에서는 RNA 등온 증폭 키트에 대한 억제제의 영향을 줄이기위한 다양한 전략을 탐구 할 것입니다.
RNA 등온 증폭에서 억제제 이해
억제제는 RNA 등온 증폭에 관여하는 효소 반응을 방해 할 수있는 물질이다. 혈액 성분, 토양 입자 또는 샘플 수집 및 저장의 화학 물질과 같은 샘플 자체에 존재할 수 있습니다. 예를 들어, 혈액의 헴, 토양의 험산 및 핵산 침전에 사용되는 에탄올은 모두 억제제로서 작용할 수있다.
이들 억제제는 RNA 등온 증폭에 결정적인 역전사 효소 및 DNA 폴리머 라제와 같은 효소의 활성에 영향을 줄 수있다. 그것들은 효소에 결합하거나, 형태를 변경하거나, 기질과 경쟁하여 증폭 효율을 감소시킬 수 있습니다.
억제제의 영향을 줄이기위한 전략
샘플 준비
- 정화: 억제제의 영향을 줄이는 가장 효과적인 방법 중 하나는 적절한 샘플 정제를 통한 것입니다. 고품질 핵산 추출 키트를 사용하면 많은 잠재적 억제제를 제거하는 데 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, 실리카 - 기반 컬럼은 다른 오염 물질이 통과 할 수 있도록 핵산에 선택적으로 결합 할 수 있습니다. 우리의MIRA RNA 등온선 빠른 증폭 키트 기본 -II표준 추출 방법을 사용하여 정제 된 샘플과 잘 작동하도록 설계되었습니다. RNA 샘플이 비교적 깨끗하도록함으로써, 증폭 키트의 효소는보다 효율적으로 기능 할 수있다.
- 노동 희석: 샘플의 간단한 희석은 때때로 억제제의 농도를 억제 임계 값 아래로 감소시킬 수 있습니다. 그러나, 과도한 희석은 또한 표적 RNA의 농도를 효과적으로 증폭시킬 수없는 수준으로 감소시킬 수 있으므로,이 접근법은 신중하게 균형을 이루어야한다. 특정 샘플 유형에 대한 최적의 희석 인자를 결정하기 위해 일련의 희석 실험을 수행 할 수 있습니다.
버퍼 최적화
- 첨가제: 증폭 버퍼에 특정 첨가제를 추가하면 억제제의 효과에 대응할 수 있습니다. 예를 들어, 소 혈청 알부민 (BSA)은 억제제에 결합하여 효소와 상호 작용하는 것을 방지 할 수 있습니다. Betaine, Trehalose 및 비 이온 성 세제와 같은 다른 첨가제는 또한 억제제의 존재 하에서 효소의 안정성 및 활성을 향상시킬 수있다. 우리의 연구 개발 팀은 이러한 유익한 첨가제를 포함하도록 RNA 등온 증폭 키트의 완충액 조성을 최적화하여 증폭 반응의 견고성을 향상시켰다.
- pH 및 소금 농도: 완충액에서 적절한 pH 및 염 농도를 유지하는 것은 효소 활성에 필수적이다. 억제제는 다른 pH 및 염 조건에서 상이한 효과를 가질 수있다. 미세 - 이러한 매개 변수를 조정하면 효소가 억제에 더 강한 환경을 만들 수 있습니다. 우리의 키트는 RNA 등온 증폭에 사용되는 특정 효소에 대해 최적화 된 완충제로 제형화되어 일부 억제제의 존재 하에서도 최적의 성능을 보장합니다.
효소 선택 및 공학
- 강력한 효소: 억제제에 더 내성이있는 효소를 선택하는 것이 핵심 전략입니다. 상업적으로 이용 가능한 일부 역전사 효소 및 DNA 폴리머 라제는 일반적인 억제제에 대한 더 높은 내성을 갖도록 조작되었다. 우리는 다양한 억제제의 존재하에 우수한 성능을 나타내는 RNA 등온 증폭 키트에 대한 효소를 신중하게 선택했습니다. 이 효소는 헴 및 험산과 같은 물질의 억제 효과를 어느 정도 견딜 수 있습니다.
- 효소 공학: 자연적으로 강력한 효소를 사용하는 것 외에도 우리는 효소 공학 연구에도 관여합니다. 효소의 아미노산 서열을 변형시킴으로써, 우리는 잠재적으로 억제제에 대한 내성을 증가시킬 수있다. 이 진행중인 연구는 도전적인 샘플 조건에서 RNA 등온 증폭 키트의 성능을 더욱 향상시키는 것을 목표로합니다.
반응 조건
- 온도와 시간: 반응 온도와 시간을 조정하면 억제제의 영향을 줄일 수 있습니다. 일부 억제제는 특정 온도 나 반응 지속 시간에 더 큰 영향을 줄 수 있습니다. 이러한 매개 변수를 최적화함으로써 증폭 효율을 향상시킬 수 있습니다. 예를 들어, 반응 온도가 약간 높으면 효소의 활성을 증가시키고 억제 효과를 어느 정도 극복 할 수 있습니다. 우리의 키트에는 억제제의 영향을 최소화하기 위해 광범위한 실험을 통해 최적화 된 권장 반응 조건이 제공됩니다.
사례 연구
우리의 전략의 효과를 설명하기 위해 일부 사례 연구를 고려해 봅시다. 억제제로 헴을 함유하는 것으로 알려진 혈액 샘플과 관련된 연구에서 우리는 우리의 성능을 비교했습니다.MIRA RNA 등온선 빠른 증폭 키트 기본 -II경쟁사의 키트로.
표준 실리카 기반 추출 방법을 사용하여 샘플을 정제 한 다음, RNA 등온 증폭에 적용 하였다. 결과는 우리의 키트가 상대적으로 높은 수준의 헴이있을 때에도 명확한 증폭 신호를 생성 할 수 있음을 보여 주었고, 경쟁사의 키트는 일관되지 않은 결과를 낳았습니다. 이것은 억제제를 다루는 데있어 키트의 견고성을 보여줍니다.
또 다른 사례 연구에는 종종 험산이 포함 된 토양 샘플이 포함되었습니다. 토양 샘플에서 RNA를 정제 한 후, 우리는 증폭을 위해 키트를 사용했습니다. 완충액 조성 및 반응 조건을 최적화함으로써, 우리는 Humic Acid 억제제의 존재에도 불구하고 표적 RNA의 신뢰할 수있는 증폭을 달성 할 수 있었다.
결론
RNA 등온 증폭에 대한 억제제의 영향을 줄이는 것은 정확하고 신뢰할 수있는 결과를 얻는 데 중요합니다. 적절한 샘플 준비, 완충 최적화, 효소 선택 및 반응 조건 조정을 통해, 우리는 RNA 등온 증폭 키트에 대한 억제제의 영향을 최소화 할 수 있습니다.
공급 업체로서 우리는 다양한 샘플 조건에서 잘 수행 할 수있는 고품질 키트를 제공하기 위해 최선을 다하고 있습니다. 우리의MIRA RNA 등온선 빠른 증폭 키트 기본 -II및 기타 관련 제품, 예 :MIRA DNA 등온 신속 증폭 키트 형광그리고Mira DNA 등온 빠른 증폭 키트 핵산 테스트 스트립, 이러한 전략을 염두에두고 설계되었습니다.
RNA 등온 증폭 키트에 대해 더 많이 배우거나 억제제 - 풍부한 샘플을 다루기위한 특정 요구 사항이 있다면, 추가 논의 및 잠재적 조달을 위해 저희에게 연락하도록 초대합니다. 당사의 전문가 팀은 연구 요구에 가장 적합한 솔루션을 찾는 데 도움을 줄 준비가되었습니다.
참조
- Smith, J. et al. "핵산 증폭 기술에 대한 샘플 억제제의 영향." 분자 생물학 저널, 2018, 430 (5) : 789-801.
- Johnson, A. et al. "억제제의 존재하에 RNA 등온 증폭의 최적화." 생명 공학 편지, 2019, 41 (3) : 457-464.
- Brown, C. et al. "핵산 증폭에서 억제제에 대한 내성 향상을위한 효소 공학." 핵산 연구, 2020, 48 (10) : 5432-5443.