여기서는 20분 이내에 ASFV를 감지하는 신속하고 추출이 필요 없는 진단 플랫폼인 sCRAM(다중효소 등온 급속 증폭과 결합된 차선의 프로토스페이서 인접 모티프(PAM)-매개 CRISPR RNA 및 Cas12a 뉴클레아제)을 확립합니다. sCRAM은 MIRA(다효소 등온 증폭)와 최적이 아닌 PAM-매개 CRISPR/를 결합한 단일{7}}튜브 반응과 빠른 핵산 방출 단계(40도, 5분)를 통합합니다.
Cas12a 시스템(37도, 15분), UV 광 또는 측면 흐름 스트립(LFS)을 통해 기기-없이 시각적 판독이 가능합니다. sCRAM은 단일-복제 감지 감도를 보여주고 5가지 일반적인 돼지 병원체(PRRSV, PPV, JEV, PCV 및 PRV)와 교차-반응성을 나타내지 않습니다. 111개의 시뮬레이션 및 임상 샘플(혈액, 혈장 및 면봉 포함)을 평가한 결과 UV 판독의 경우 qPCR과 100% 일치하고 LFS의 경우 98.20% 일치하는 것으로 나타났습니다.
두 방법 모두 100% 특이성을 나타내는 판독입니다. sCRAM의 단순성, 속도 및 현장 적응성은 자원-이 제한된 환경에서 분산형 ASFV 감시의 잠재력을 강조하며, 확산 억제를 위한 강력한 도구를 제공합니다.
이 연구에서 우리는 차선의 PAM-매개 CRISPR/Cas12a와 다중효소 등온 증폭을 통합한 신속하고 현장 배포 가능한 ASFV 감지 플랫폼인 sCRAM을 개발했습니다.{0} 이 분석은 20분 이내에 단일{4}}복사본 1복사/uL 민감도를 달성하고 주요 돼지 병원체와 교차 반응을 나타내지 않습니다.- 혈액, 혈장 및 면봉 샘플에 대한 임상 검증에서는 UV 광 판독을 사용하는 qPCR과 측면 흐름 스트립을 통한 98.20% 정확도를 통해 완전한 일치가 입증되었습니다. 단순화된 작동, 높은 민감도 및 특이성, 시각적 결과 해석을 통해 sCRAM은 현장 ASFV 감시 및 광범위한 현장 진단 애플리케이션에 대한 강력한 잠재력을 제공합니다.-
