Yo, 동료 과학 애호가! 높은 처리량 DNA 시퀀싱을 위해 DNA 폴리머 라제를 최적화하는 것에 대해 당신과 대화를 나누었습니다. DNA 폴리머 라제 공급 업체로서, 나는이 절단 - 에지 기술에 대해 최고 - 노치 폴리머 라제를 갖는 것이 얼마나 중요한지 직접 보았다.
높은 처리량 DNA 시퀀싱은 유전체학에 혁명을 일으켰습니다. 그것은 우리가 짧은 시간에 많은 양의 DNA를 서열 할 수있게 해주므로 개인화 된 약, 유전 질환 이해, 심지어 진화 연구와 같은 것들에 매우 중요합니다. 그러나 이것이 실제로 잘 작동하려면 최적화 된 DNA 폴리머 라제가 필요합니다.
DNA 폴리머 라제가 실제로하는 일부터 시작합시다. 성장하는 사슬에 뉴클레오티드를 첨가하여 새로운 DNA 가닥을 합성하는 효소입니다. 높은 처리량 시퀀싱에서는 빠르게 작동하고 정확하며 다양한 유형의 DNA 템플릿을 처리하기를 원합니다.
속도가 중요합니다
높은 처리량 시퀀싱의 주요 요소 중 하나는 속도입니다. DNA 폴리머 라제가 더 빨리 뉴클레오티드를 첨가할수록 시퀀싱을 더 빨리 얻을 수 있습니다. 속도를 최적화하기 위해 효소의 촉매 속도를 볼 수 있습니다. 일부 돌연변이는이 속도를 증가시킬 수 있습니다. 예를 들어, 중합 효소의 활성 부위를 변형시키는 것은이를 뉴클레오티드에보다 효율적으로 결합시키고 성장하는 DNA 가닥에 더 빨리 추가 할 수있다.
또한 반응 조건을 조정하면 속도를 높일 수 있음을 발견했습니다. 최적의 pH 및 이온 농도로 오른쪽 완충액을 사용하면 큰 차이가 생길 수 있습니다. 예를 들어, 마그네슘 이온은 DNA 폴리머 라제 활성에 필수적인 CO- 인자이다. 미세 - 마그네슘 농도를 조정하면 효소의 속도를 향상시킬 수 있습니다.
정확도가 핵심입니다
정확도는 속도만큼 중요합니다. 시퀀싱에서, 단일 오류는 유전자 데이터의 오해로 이어질 수있다. DNA 폴리머 라제에는 교정 활성이있어 DNA 합성 동안 오류를 교정하는 데 도움이됩니다. 정확성을 최적화하기 위해이 교정 기능을 향상시킬 수 있습니다. 우리의 폴리머 라제 중 일부M -MLV H -2.0, 교정 기능이 향상되도록 설계되었습니다. 이는 더 적은 오류와보다 안정적인 시퀀싱 결과를 의미합니다.
정확도를 향상시키는 또 다른 방법은 비 특정 결합을 줄이는 것입니다. 때때로, 폴리머 라제는 잘못된 주형에 결합하거나 잘못된 위치에 뉴클레오티드를 첨가 할 수 있습니다. 올바른 DNA 템플릿에보다 구체적으로 만들기 위해 폴리머 라제의 구조를 수정함으로써 이러한 오류를 최소화 할 수 있습니다.
다른 템플릿을 처리합니다
DNA는 모든 모양과 크기로 제공되며 높은 처리량 시퀀싱은 종종 다양한 템플릿을 다룹니다. 일부 템플릿은 GC 함량이 높은 템플릿이나 2 차 구조를 가진 템플릿과 같이 시퀀싱하기가 어려울 수 있습니다. 이러한 어려운 템플릿에 대한 DNA 폴리머 라제를 최적화하기 위해 액세서리 단백질을 추가 할 수 있습니다. 예를 들어,SC Reca 2.0DNA 2 차 구조를 풀고 폴리머 라제가 템플릿에 쉽게 접근하고 새로운 DNA를 합성 할 수 있도록 도와줍니다.
우리는 또한 폴리머 라제 자체를 다른 템플릿의 더 내성으로 변형시킬 수 있습니다. 일부 돌연변이는 효소가 높은 GC 함량 또는 기타 어려운 - 서열 영역을 다루는 데 더 나은 효소를 만들 수 있습니다.
안정성과 장수
높은 처리량 시퀀싱에서 폴리머 라제는 활성을 잃지 않고 오랫동안 작동해야합니다. 우리는 효소의 구조를 변형하여 변성에보다 강력하게 만들어 안정성을 최적화 할 수 있습니다. 예를 들어, 이황화 결합을 첨가하면 단백질의 안정성이 증가 할 수 있습니다.
또 다른 측면은 효소의 선반 - 생명입니다. 우리는 폴리머 라제가 보관하는 동안 오랫동안 활성을 유지하기를 원합니다. 올바른 완충액 및 저장 조건을 공식화함으로써 중합 효소가 안정적이고 필요할 때 사용할 준비가되도록 보장 할 수 있습니다.
시퀀싱 플랫폼과의 호환성
다른 높은 처리량 시퀀싱 플랫폼에는 고유 한 요구 사항이 있습니다. 예를 들어, 일부 플랫폼은 형광 - 기반 탐지를 사용하는 반면 다른 플랫폼은 나노 포어 기술을 사용합니다. 이러한 다른 플랫폼과 호환되도록 DNA 폴리머 라제를 최적화해야합니다.
형광 - 기반 플랫폼의 경우, 폴리머 라제는 형광 신호를 방해해서는 안됩니다. 우리는 중합 효소가 배경 형광성을 갖도록 설계하고 시퀀싱 반응에 사용 된 염료와 잘 어울릴 수 있습니다.
나노 포어 시퀀싱에서, 중합 효소는 나노 포어의 특정 전기 및 화학 조건 하에서 작동 할 수 있어야한다. 이러한 요구 사항을 이해함으로써 이러한 유형의 시퀀싱에 더 적합하도록 폴리머 라제를 수정할 수 있습니다.
우리의 제품 포트폴리오
DNA 폴리머 라제 공급 업체로서, 우리는 높은 처리량 시퀀싱의 요구를 충족시키기 위해 설계된 다양한 제품을 제공합니다. 우리의M -MLV H -2.0역전사에 적합하며 정확도가 우수합니다. 그만큼SC Reca 2.0템플릿 취급을 개선하기 위해 액세서리 단백질로 사용될 수 있습니다. 그리고 우리엑소 뉴 클레아 제 III 2.0워크 플로우 시퀀싱의 다양한 DNA 처리 단계에 사용할 수 있습니다.
고급 처리량 시퀀싱 프로젝트를위한 고품질 DNA 폴리머 라제 시장에 있다면, 우리는 당신과 이야기하고 싶습니다. 연구소, 생명 공학 회사 또는 제약 회사이든, 우리는 올바른 제품과 지원을 제공 할 수 있습니다. 귀하의 특정 요구 사항과 DNA 폴리머 라제가 시퀀싱 프로세스를 최적화 할 수있는 방법에 대한 대화를 시작하려면 저희에게 연락하십시오.
참조
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). 세포의 분자 생물학. 갈랜드 과학.
- 브라운, 타 (2002). 게놈. 와일리 -리스.
- Metzker, ML (2010). 시퀀싱 기술 - 차세대. Nature Reviews Genetics, 11 (1), 31-46.